БакПосев: как?

Квалифицированное бактериологическое исследование (бак посев) позволяет оценить весь состав аэробной и микроаэрофильной микрофлоры в исследуемом материале. Каковы методики проведения этого лабораторного анализа?

Они могут варьировать в зависимости от  цели диагностического исследования, исследуемого материала, подозрения на тот или иной возбудитель.

Следует отличать бак.посев от других видов бактериологического исследования, в частности от микроскопии мазка. Задача микроскопии – визуально обнаружить клетки микроорганизмов в исследуемом материале (мазке). Задача посева – получить колонии возбудителя на питательных средах, и тем самым обнаружить его. Микроскопия – экспресс-метод, позволяет довольно быстро получить результаты. Однако точность этого метода (чувствительность) гораздо ниже, чем бак.посева. Микроскопия позволяет лишь примерно определить тип возбудителя – кокки, палочки, дрожжи. Бак. посев в свою очередь позволяет точно определить вид микроорганизма, его количество, и чувствительность к лекарственным препаратам.

Итак, для проведения бак.посева прежде всего необходимо грамотно отобрать клинический материал для исследования (подробнее см. Правила отбора патматериала для микробиологического исследования). Если патологический процесс идет на коже, слизистых, делают мазок материала ватным тампоном. Обычно используют коммерческие «свобы» (тампоны-зонды), которую помещают в пробирку с транспортной средой. В таком виде материал может храниться несколько суток. Если тампон помещается в сухую пробирку, то он должен быть происследован в тот же день.

Содержимое абсцессов, папул, везикул и т.д. отбирают обычно шприцем, соблюдая правила асептики. Жидкий         материал (мочу, сперму, грудное молоко и т.д.) отбирают в стерильные контейнеры с резьбовой крышкой. Такой материал должен быть доставлен для исследования в лабораторию в тот же день, его хранение не допускается. Пересылка материала для бак посева должна осуществляться в термоизолированных сумках.

В бактериологической лаборатории проводят посев клинического материала на питательные среды, после чего посевы инкубируют в определенных условиях. Важно, чтобы использовались качественные стандартизованные питательные среды, предпочтительно известных производителей. В различных диагностических лабораториях используют различные алгоритмы посева. Оптимально, когда материал высевают на набор различных сред, обеспечивающих рост всех групп патогенных микроорганизмов. Обычно используют специальные дифференциально-диагностические среды, на которых опытный микробиолог практически сразу может определить вид возбудителя, и дополнительные тесты уже не нужны. Хотя такие среды довольно дороги, они позволяют существенно сократить время исследования. Если вид микроорганизма таким образом определить не удается, проводят его идентификацию с помощью дополнительных биохимических тестов.

Условия выращивания бактериологических посевов также играют большую роль. Должна поддерживаться оптимальная температура; определенные микроорганизмы требовательны к содержанию углекислого газа, а некоторые нуждаются в анаэробных (безкислородных) условиях. Все эти факторы должны учитываться специалистами лаборатории.

Когда выращивание посевов закончено, определяют вид выделенных микроорганизмов, и подсчитывают количество выросших колоний. Это дает представление о количественном содержании микроба в клиническом материале, что имеет определенное диагностическое значение.

Следующий этап бактериологического исследования – определение чувствительности обнаруженных бактерий к антибиотикам и фагам («определение АЧ», «подтитровка АЧ»). Обычно в материале обнаруживается не один, а несколько видов микроорганизмов, и у каждого из них чувствительность должна определяться индивдуально.

Чувствительность к антибиотикам обычно определяют диско-диффузионным методом. На поверхность питательной среды вносят взвесь микробных клеток, а сверху помещают диски, пропитанные антибиотиками. Посевы выращивают, и затем учитывают зоны подавления роста микроба вокруг дисков. Измеряют диаметр этих зон, и в зависимости от этого относят микроорганизм к одной из трех групп – чувствительный, устойчивый, промежуточный.

Наборы антибиотиков, к которым определяется чувствительность, варьируют у разных лабораторий. Обычно используют разные наборы для разных групп микроорганизмов – грамположительных и грамотрицательных. Помимо этого, у выделенных стафилококков определяют метициллинрезистентность (выявление МРС), наличие которой свидетельствует о резистентности ко всем бета-лактамным антибиотикам. У грамотрицательных микроорганизмов (родов Escherichia, Klebsiella,  Pseudomonas и др.) выявляют наличие БЛРС (бета-лактамаз расширенного спектра), что свидетельствует о резистентности ко всем пенициллинам и цефалоспоринам I-IV поколений. Все эти сведения указываются в ответе лаборатории.

Следует отметить, что обнаружение того или иного микроба не всегда говорит о его этиологической роли. Хотя бак.посев является ценнейшим диагностическим методом, диагноз должен ставиться на основании комплекса анамнестических и диагностических данных.

Диагностика грибковых возбудителей (т.н. «бакпосев на грибы») отличается от бактериологической диагностики (подробнее см.  Посев на грибы – микологическое исследование). Микологическое исследование направлено на выявление всего спектра клинически значимых грибов, дрожжей и актиномицетов, и включает микроскопию патматериала на наличие элементов грибов, посев на селективные питательные среды для выделения всего спектра клинически значимых грибов и актиномицетов, определение чувствительности грибов к антимикотикам. Ответ выдаётся на 14 день, однако посевы выращиваются до 21 дня для выделения медленнорастущих грибов.

Наибольшей диагностической ценностью обладает комплексное микробиологическое исследование, объединяющие бактериологический и микологический анализы. Несколько лет назад исследования были узконаправленными. Например, отдельно сдавали «анализ на бак.посев», «анализ на лишай», «анализ на кандиду» и т.д. Зачастую пациентам приходилось сдавать все вышеперечисленные анализы по очереди, пока какой-нибудь из них не оказывался действительно полезным.

В результате такого исследования врач и пациент получают наиболее полное представление о микробной флоре у больного животного, а также о средствах терапии – у выделенных микроорганизмов определяется чувствительность к антибиотикам (антмикотикам) и бактериофагам. Это наиболее достоверный и информативный метод микробиологического  исследования, который позволяет назначить оптимальное лечение. Заменить такое исследование пока не могут даже самые современные методы вроде ПЦР.

Некоторые врачи и пациенты предпочитают «быстрые» методы диагностики, такие как микроскопия мазка, микроскопия шерсти или тест с лампой Вуда на дерматофиты. Хотим предостеречь, что эти методы по сути являются ориентировочными, низко чувствительными (неточными), и часто приводят к ошибочным диагнозам. Экспериментально подтверждено, что метод посева на питательные среды гораздо более точный, нежели метод микроскопии. Это касается и бактериальных, и грибковых возбудителей. Кроме того, при посеве мы выделяем культуру возбудителя, можем точно определить его вид, определить чувствительность к лекарственным средствам и индивидуально подобрать оптимальный препарат. Таким образом, время, затраченное на комплексное микробиологическое исследование, полностью себя оправдывает.

Источник: www.bakposev-vet.ru