Диагностика Malassezia-инфекций. Микроскопические методы.

Клетки Malassezia spp. и бактерий в окрашенном мазке

Лабораторные исследования играют решающую роль в диагностике заболеваний, вызываемых грибами рода Malassezia, т.к. клинически Malassezia–инфекции могут напоминать аллергические реакции, атопии, стафилококковые инфекции, демодекоз, дерматофитоз, чесотку, эпителиотрофические новообразования. Однако диагностика осложняется тем, что все эти заболевания могут протекать одновременно с Malassezia-инфекцией. Определяющим диагностическим тестом является микробиологическое исследование, позволяющее оценить микробный пейзаж в очаге поражения, выявить наличие грибов рода и других инфекционных агентов.  Для обнаружения грибов рода Malassezia в клиническом материале на практике используются цитологические (микроскопические), культуральные методы (посев) и их сочетание.

Цитологическое исследование обычно включает фиксацию препарата, его окраску и микроскопию в сухой или иммерсионной системе микроскопа. Для обнаружения клеток Malassezia может быть использовано несколько методов окраски. Большинство зарубежных авторов используют окраску Diff-Quick, являющуюся модифицированным методом Райта (Wright), и выпускаемую промышленным способом. При этом способе клетки гриба окрашиваются в сине-фиолетовый, реже в красно-розовый цвет. Однако этот метод окраски далеко не единственный и не может считаться безоговорочным стандартом.

Применяются также такие красители, как метиленовый синий, чернила Паркер, кристалл-виолет. В наших собственных лабораторных исследованиях мы применяем окраску мазков по Граму. При этом грибы рода Malassezia, а также Candida и другие, окрашиваются грамположительно, т.е. в темно-синий цвет. Важнейшим преимуществом метода является то, что наряду с грибами он позволяет обнаружить и дифференцировать бактериальные микроорганизмы, что значительно повышает информативность микроскопического исследования. Часто в препаратах наряду с грибами рода Malassezia обнаруживается бактериальная микрофлора. В большинстве микробиологических лабораторий окраска по Граму используется и для микроскопии патматериала, и для микроморфологического изучения выделенных культур микроорганизмов и является бесспорным стандартом в бактериологии. Так как она вполне пригодна и для обнаружения дрожжевых грибов, внедрять в лаборатории дополнительные методы окраски не представляется целесообразным.

Микроскопию проводят при увеличении х1000 в иммерсионной системе, хотя ряд авторов использует сухую систему микроскопа (увеличение х400). Для оценки численности популяции грибов рода Malassezia до сих пор не существует стандартных общепринятых показателей. Так, D. Morris et al. считают максимально допустимым нормальным количеством 1 клетку в мазках с кожи и 5 клеток в мазках из ушного канала в одном поле зрения при микроскопии с иммерсией.

В нашей лабораторной практике мы достаточно редко сталкиваемся с проблемой интерпретации количества дрожжевых клеток. По нашему опыту, если в мазке от больных животных обнаруживаются клетки Malassezia  spp., то они присутствуют в  значительном количестве, однозначно свидетельствующем о высокой плотности популяции гриба. Тем не менее, когда обнаруживаются даже единичные клетки, это расценивается как настораживающий признак. Результаты микроскопии всегда следует соотносить с данными культурального исследования.

Материал подготовлен редакцией БакПосев-Вет.Ру по материалам статьи: Овчинников Р.С., Маноян М.Г., Ершов П.П., Гайнуллина А.Г. , Панин А.Н. «Грибы рода Malassezia в заболеваниях животных. Клинические формы, диагностика, терапия». Vetpharma – 2013 — №3 – стр. 37-53